调节的蛋白质稳定性的降
我们还设计了一种 SULI 变体，其在黑暗条件下半衰期显着缩短为 0.5-1 小时，SULI f，通过在 SULI 结构域中引入 I74V/C76V/M135L 三重突变，已知这些突变会影响 VVD 的热回复（补充图 9 ，补充表 1）。此外，SULI可以通过反复调节积累和降解来以振荡方式切换目标蛋白的丰度（图 3b）。 图 3：SULI 的动力学特征。 图3 a SULI解动力学。然后将在光照射下培养的表达不同SULI融合蛋白的酵母细胞与CHX一起孵育并转移至黑暗条件或保持在光照条件下。通过流电话号码数据库式细胞术记录指定时间点的融合蛋白的荧光。将数据标准化为时间 0 分钟时的荧光。乙SULI 对蛋白质丰度的振荡控制。表达mCherry-SULI的酵母细胞在明暗条件下交替培养，间隔5小时，总共20小时。使用酶标仪测量指定时间点的 mCherry 荧光。将数据标准化为在每个
https://lh3.googleusercontent.com/0duNGPP8_HWyXcdFtYT27s_jr0yeyynFSFG95tIMn9KqnBznofV63eyH6YZJCi5-bIEOwKHYq29ODkEkEQAa-ZdJT78HjHLo7ncwA36h6y5FZR5FjAZGXs4XtM0nkbuTO8wFYeEvemOeStDn0mm_M5o
指定时间点单独表达 mCherry 的细胞的数据。数据以三个生物重复的平均值±SD 表示。c SULI 或 AuLOV-cODC1 对蛋白质稳定性的光辐照依赖性调节。通过流式细胞术收集数据并标准化为在每种指定的蓝光条件下单独表达 mCherry 的细胞的数据。a – c中的数据表示为三个生物重复的平均值±SD。d SULI 对蛋白质丰度的空间控制。表达 m
页:
[1]